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如何避免PCR實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)污染，有哪些辦法
發(fā)布時(shí)間： 2021-11-01 點(diǎn)擊次數(shù)： 1846次PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，由于PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過正是由于它靈敏度*，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性，因此，如何避免以及處理實(shí)驗(yàn)室污染，對PCR人來說是一門必修課。一、樣本間交叉污染：主要是在采（取）樣的過程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過程中，由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。二、PCR試劑的污染：主要是在PCR試劑配制過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。三、克隆質(zhì)粒的污染：在PCR實(shí)驗(yàn)室操作中經(jīng)常會用到陽性參考品，這些陽性參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成，克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用很容易造成污染。四、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染這是PCR反應(yīng)中主要常見的污染問題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可造成假陽性結(jié)果。還有一種容易忽視，可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染，在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠，據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含4.8萬拷貝，因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問題。污染消除判斷標(biāo)準(zhǔn)：設(shè)計(jì)陰性對照組，根據(jù)陰性對照確認(rèn)污染情況。可使用敞開后隔夜放置操作區(qū)的陰性對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（在單獨(dú)的PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證），若連續(xù)三天陰性對照沒有起跳，則說明污染得到控制，可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn)。
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